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La Princesse Peach fête son anniversaire avec Mario, Luigi et les Toads. Tandis que la princesse admire ses cadeaux d'anniversaire, un énorme gâteau fait son entrée. C'est alors que les Koopalings et Bowser Jr sortent du gâteau et enferment la princesse à l'intérieur avant de l'enlever. Les deux frères et les Toads se lancent à la poursuite des Koopas. Deux autres Toads vont alors propulser deux nouveaux objets, les champignons hélice et les costumes de pingouin, pour que le héros de l'histoire puisse les utiliser.

No More Heroes 2 : Desperate Struggle vous propose de suivre l’histoire de Travis Touchdown, otaku, fan de catch, et accessoirement assassin professionnel. Après plus de 3 ans d’absence, Travis se retrouve malheureusement dans les bas fonds du classement UAA (United Assassins Association) et doit donc se remettre au travail pour devenir à nouveau le n°1.