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Le jeu propose un multijoueur pour jusqu'à quatre joueurs. En plus de Mario, Luigi et Toad, la princesse Peach devient désormais un personnage jouable ! Le multijoueur déjanté représente une nouvelle manière de s'amuser avec des jeux Mario en 3D, puisque les joueurs peuvent s'entraider ou au contraire se mettre des bâtons dans les roues. Ce titre inclut également une nouvelle transformation : Mario Chat. Cette nouvelle transformation, permet de grimper aux murs et d'attaquer les ennemis avec les griffes.